LyoDt® Real-Time PCR Detection Reagent for Cronobacter Freeze-Dried Powder

LyoDt® Real-Time PCR Detection Reagent for Cronobacter Freeze-Dried Powder

1.Wprowadzenie

Kronobacterjest nowym rodzajem bakterii, którego poprzednikiem jestEnterobacter sakazakii. Kronobacterjest poważnym patogenem przenoszonym przez żywność, który przenosi się głównie przez skażoną formułę dla niemowląt, powodując zapalenie opon mózgowych noworodków, sepsę i enterokolitykę nekrotyzującą.

Niniejszy produkt jest suszonym lodowym reagentem PCR w czasie rzeczywistym do wykrywaniaKronobacterWykorzystuje wysoce zachowany gen ompAKronobacterJest to mieszanka mistrzowska zawierająca wszystkie niezbędne składniki, z wyjątkiem wzoru DNA, i jest wstępnie dystrybuowana jako pojedynczy test w rurkach PCR w celu łatwego użycia.Produkt ten nie wymaga łańcucha chłodnego do transportu i przechowywania, co znacząco obniża koszty wysyłki i eliminuje ewentualne straty spowodowane marnotrawstwem odczynników i zanieczyszczeniem aerozolami.

2Specyfikacje i skład

3. STROJENIE I okres trwałości

Przechowywać w temperaturze otoczenia (5-30°C). Jest stabilny przez okres do 12 miesięcy. Po otwarciu opakowania próżniowego należy przechowywać niewykorzystane produkty w dostarczonej plastikowej torbie z środkami wysuszającymi.i w worku z folii aluminiowej.

UWAGA:

Zmniejszanie się peletu reagentu jest oznaką wniknięcia wilgoci do rurki i zmniejszenia wilgotności reagentu.Wszelkie odczynniki o znacznie mniejszym rozmiarze granulki niż zwykle należy usunąć lub przetestować z kontrolą dodatnią przed użyciem.do badań próbek.

4. Wymagane dodatkowe wyposażenie i odczynniki

1) Instrument PCR w czasie rzeczywistym

2) Pipety i wskazówki

3) Woda wolna od nukleaz

4) Zestaw do ekstrakcji kwasu nukleinowego

5Kompatybilne systemy PCR w czasie rzeczywistym

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. akceptowalne próbki

Bród do wzbogacania żywności, wymioty, próbki biegunki itp.

7Procedura operacyjna

1) Ekstrakcja kwasu nukleinowego

Wyciągamy DNA z próbek za pomocą odpowiedniego zestawu.Zaleca się, abyDNAjest eluowany około 100 μl buforu elucyjnego(TElubH wolny od nukleaz₂O) w ostatnim etapiewydobycie.Oczyszczony kwas nukleinowy należy zużyć natychmiast lub przechowywać w temperaturze -20°C.

2) Przygotowanie kontroli pozytywnej

Kontrola dodatnia może być przechowywana w temperaturze otoczenia przed rehydratacją przez okres do 12 miesięcy.₂O, wiruje się przy niskiej prędkości przez 15-20 sekund i odśrodkowuje się przy niskiej prędkości przez 15-20 sekund.

3) Przygotowanie mieszaniny PCR w czasie rzeczywistym

A) Otwórz opakowanie próżniowe i wyciągnij 8-rurowe taśmy zawierające odczynnik.Jeśli dostarczone rurki nie są kompatybilne z przyrządem, przenieść peletę odczynnika do rurki optycznej zgodnej z przyrządem.

B) Otwórz rurki i wyrzuć pokrywę (nie nadającą się do urządzeń PCR w czasie rzeczywistym) i przygotuj mieszaninę reakcyjną na lodzie, jak poniżej.

Krokwydobycie.Oczyszczony kwas nukleinowy należy zużyć natychmiast lub przechowywać w temperaturze -20°C.

2) Przygotowanie kontroli pozytywnej

Kontrola dodatnia może być przechowywana w temperaturze otoczenia przed rehydratacją przez okres do 12 miesięcy.₂O, wiruje się przy niskiej prędkości przez 15-20 sekund i odśrodkowuje się przy niskiej prędkości przez 15-20 sekund.

3) Przygotowanie mieszaniny PCR w czasie rzeczywistym

A) Otwórz opakowanie próżniowe i wyciągnij 8-rurowe taśmy zawierające odczynnik.Jeśli dostarczone rurki nie są kompatybilne z przyrządem, przenieść peletę odczynnika do rurki optycznej zgodnej z przyrządem.

B) Otwórz rurki i wyrzuć pokrywę (nie nadającą się do urządzeń PCR w czasie rzeczywistym) i przygotuj mieszaninę reakcyjną na lodzie, jak poniżej.

* Woda wolna od nukleaz może być stosowana jako kontrola negatywna.

• Zapewnij PCR za pomocą zakrywek (przepasów) odpowiednich do PCR w czasie rzeczywistym (nie podano).

D) Wrzucić rurki z niską prędkością przez 10 ~ 15 sekund, i odśrodkować przy 3000 obr./min przez 20 sekund i umieścić je w przyrządzie PCR w czasie rzeczywistym.

2) Ustawienie RT-PCR

Ustawić objętość reakcji na 25 μl i procedurę wzmacniania PCR zgodnie z poniższym.

3) Analiza i interpretacja wyników