Zestaw szybkich badań bezpieczeństwa żywności oparty na technologii PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania salmonelli w monitorowaniu bezpieczeństwa żywności

Zestaw do wykrywania PCR w czasie rzeczywistym LyoDt® dla Salmonelli w proszku suszonym lodowym

1.Wprowadzenie

Salmonellajest gram-negatywną bakterią enterobakteryjną i powszechnym patogenem przenoszonym przez żywność. Bakterie te są szeroko rozpowszechnione w przyrodzie i często kolonizują jelita ludzi i zwierząt, zwłaszcza drobiu,zwierzęta gospodarskie, i zwierzęta domowe.Salmonellazanieczyszczenia obejmują: mięso i produkty mięsne, jaja i produkty z jaj, mleko i produkty mleczne itp.

Niniejszy produkt jest suszonym lodowym reagentem PCR w czasie rzeczywistym do wykrywaniaSalmonella. Używa wysoko konserwowanego genu invASalmonellaJest to mieszanka mistrzowska zawierająca wszystkie niezbędne składniki, z wyjątkiem wzoru DNA, i jest wstępnie dystrybuowana jako pojedynczy test w rurkach PCR w celu łatwego użycia.Produkt ten nie wymaga łańcucha chłodnego do transportu i przechowywania, co znacząco obniża koszty wysyłki i eliminuje ewentualne straty spowodowane marnotrawstwem odczynników i zanieczyszczeniem aerozolami.

2Specyfikacje i skład

3. STROJENIE I okres trwałości

Przechowywać w temperaturze otoczenia (5-30°C). Jest stabilny przez okres do 12 miesięcy. Po otwarciu opakowania próżniowego należy przechowywać niewykorzystane produkty w dostarczonej plastikowej torbie z środkami wysuszającymi.i w worku z folii aluminiowej.

UWAGA:

Zmniejszanie się peletu reagentu jest oznaką wniknięcia wilgoci do rurki i zmniejszenia wilgotności reagentu.Wszelkie odczynniki o znacznie mniejszym rozmiarze granulki niż zwykle należy usunąć lub przetestować z kontrolą dodatnią przed użyciem.do badań próbek.

4. Wymagane dodatkowe wyposażenie i odczynniki

1) Instrument PCR w czasie rzeczywistym

2) Pipety i wskazówki

3) Woda wolna od nukleaz

4) Zestaw do ekstrakcji kwasu nukleinowego

5Kompatybilne systemy PCR w czasie rzeczywistym

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. akceptowalne próbki

Bród do wzbogacania żywności, wymioty, próbki biegunki itp.

7Procedura operacyjna

1) Ekstrakcja kwasu nukleinowego

Wyciągamy DNA z próbek za pomocą odpowiedniego zestawu.Zaleca się, abyDNAjest eluowany około 100 μl buforu elucyjnego(TElubH wolny od nukleaz₂O)w ostatnim etapiewydobycie.Oczyszczony kwas nukleinowy należy zużyć natychmiast lub przechowywać w temperaturze -20°C.

2) Przygotowanie kontroli pozytywnej

Kontrola dodatnia może być przechowywana w temperaturze otoczenia przed rehydratacją przez okres do 12 miesięcy.₂O, wiruje się przy niskiej prędkości przez 15-20 sekund i odśrodkowuje się przy niskiej prędkości przez 15-20 sekund.

3) Przygotowanie mieszaniny PCR w czasie rzeczywistym

A) Otwórz opakowanie próżniowe i wyciągnij 8-rurowe taśmy zawierające odczynnik.Jeśli dostarczone rurki nie są kompatybilne z przyrządem, przenieść peletę odczynnika do rurki optycznej zgodnej z przyrządem.

B) Otwórz rurki i wyrzuć pokrywę (nie nadającą się do urządzeń PCR w czasie rzeczywistym) i przygotuj mieszaninę reakcyjną na lodzie, jak poniżej.

* Woda wolna od nukleaz może być stosowana jako kontrola negatywna.

C) Zabezpieczyć PCR za pomocą czapek (pasek) odpowiednich do PCR w czasie rzeczywistym (nie podane).

D) Wrzucić rurki z niską prędkością przez 10 ~ 15 sekund, i odśrodkować przy 3000 obr./min przez 20 sekund i umieścić je w przyrządzie PCR w czasie rzeczywistym.

2) Ustawienie RT-PCR

Ustawić objętość reakcji na 25 μl i procedurę wzmacniania PCR zgodnie z poniższym.

3) Analiza i interpretacja wyników