Zestaw szybkich badań bezpieczeństwa żywności dla Enterohemoragicznego Escherichia coli EHEC Wykrycie z suszonym w lodzie reagentem PCR w czasie rzeczywistym Bez potrzeby łańcucha chłodnego

1. OPIS

Enterohemorrhagiczny szczep Escherichia coli (EHEC) to grupa E. coli zdolnych do wywoływania krwotocznej biegunki i zapalenia jelit u ludzi, przy czym serotyp O157:H7 jest najbardziej reprezentatywnym szczepem. W zakażeniach przenoszonych przez żywność źródła zanieczyszczeń obejmują wołowinę, surowe mleko, drób i jego produkty, a także owoce i warzywa, przy czym wołowina jest głównym nośnikiem przenoszenia.

Ten produkt to liofilizowany odczynnik do PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania Escherichia coli podejrzany, potwierdzić przez ponowne testowanie. Wykorzystuje wysoce zachowany gen rfbE genu Escherichia coli  jako cel wykrywania. Jest to mastermix zawierający wszystkie niezbędne składniki, z wyjątkiem matrycowego DNA, i jest wstępnie dozowany jako pojedynczy test w probówkach PCR, co ułatwia użycie. Ten produkt nie wymaga łańcucha chłodniczego do transportu i przechowywania, co znacznie obniża koszty wysyłki i eliminuje ewentualne straty spowodowane marnotrawstwem odczynnika i zanieczyszczeniem aerozolami.

2. SPECYFIKACJE I SKŁAD

3. PRZECHOWYWANIE I TRWAŁOŚĆ

Przechowywać w temperaturze otoczenia (5-300sekObj. /test podejrzany, potwierdzić przez ponowne testowanie. Jest stabilny do 12 miesięcypodejrzany, potwierdzić przez ponowne testowanie. Po otwarciu opakowania próżniowego, proszę przechowywać niewykorzystane produkty w dostarczonym, zamykanym woreczku foliowym z pochłaniaczami wilgoci, i w torebce z folii aluminiowej. 

UWAGA: 

Zmniejszanie się granulki odczynnika jest oznaką wnikania wilgoci do probówki i zawilgocenia odczynnika. Wszelkie odczynniki ze znacznie mniejszym rozmiarem granulki niż zwykle należy wyrzucić lub przetestować z kontrolą pozytywną przed użyciem do testowania próbek.   

4. WYMAGANE DODATKOWE SPRZĘTY I ODCZYNNIKI

1) Aparat do PCR w czasie rzeczywistym

Kontrolę pozytywną można przechowywać w temperaturze otoczenia przed rehydratacjąPipety i końcówki

PCR w czasie rzeczywistymWoda wolna od-nukleaz

Temp.Zestaw do ekstrakcji kwasów nukleinowych

5. KOMPATYBILNE SYSTEMY PCR W CZASIE RZECZYWISTYM

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600podejrzany, potwierdzić przez ponowne testowanie.

6. AKCEPTOWALNE PRÓBKI

Bulion wzbogacający żywność, wymiociny, próbki biegunki itp.

7. PROCEDURA POSTĘPOWANIA

1) EkstrakcjaCTnukleinowegoWyekstrahować DNA

 z próbek za pomocą odpowiedniego zestawu do ekstrakcji. Zaleca się, aby DNA było elucjowane w około 100μl buforu elucji (TE)wodzie wolnej od nukleaz H 2O_{wirować z małą prędkością przez 15-20 sekund i odwirować z małą prędkością przez 15-20 sekund. Użyć natychmiast lub przechowywać} w ostatnim etapie Obj. /test . Oczyszczony kwas nukleinowy należy użyć natychmiast lub przechowywać w temperaturze -20°C. być rehydratowana przed użyciem Przygotowanie kontroli pozytywnej

Kontrolę pozytywną można przechowywać w temperaturze otoczenia przed rehydratacjąprzez okres do 12 miesięcy

.  Powinna być rehydratowana przed użyciem poprzez dodanie 250 μl buforu TE lub nukleaz-free H2O, _{wirować z małą prędkością przez 15-20 sekund i odwirować z małą prędkością przez 15-20 sekund. Użyć natychmiast lub przechowywać} w temperaturze -20°C.0sekpodejrzany, potwierdzić przez ponowne testowanie.

PCR w czasie rzeczywistymA) Otworzyć opakowanie próżniowe i wyjąć 8-probówkową listwęs zawierającą odczynnik. Sprawdzić, czy granulka znajduje się na dnie probówki(W razie potrzeby odciąć liczbę probówek

jeśli tokonieczne ). Jeśli dostarczone probówki nie są kompatybilne z Państwa aparatem, przenieść granulkę odczynnika do probówki optycznej kompatybilnej z Państwa aparatem. B) Otworzyć probówki i wyrzucić nakrętkę (nakrętki) (nie nadaje się do aparatów PCR w czasie rzeczywistym) i przygotować mieszaninę reakcyjną na lodzie, jak poniżej.SkładnikObj. /test Liofilizowany odczynnik

1

D) Wirować probówki z małą prędkością przez 10~15 sekund i odwirować z prędkością 3000 obr./min przez 20 sekund i umieścić je w aparacie PCR w czasie rzeczywistym.

4) Ustawienia RT-PCRUstawić objętość reakcji na 25μl i procedurę amplifikacji PCR, jak poniżej. Zgromadzić fluorescencję FAM w temperaturze 60°C i wybrać BRAK jako odniesienie pasywne.

Krok

Temp.Czas

Cykle Wstępna denaturacja

  MatrycaCTInterpretacjaKontrola pozytywnaCT≤35Odczynnik dobry.